紫外分光光度计测DNA浓度的原理及步骤

使用紫外分光光度计的原理可测的DNA的浓度与纯度，它的原理是：
　　核酸的大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8,RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。紫外分光光度计只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。
　　具体操作步骤：
　　1.紫外分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
　　2.取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入紫外分光光度计的石英比色杯中。
　　3.在260nm和280nm分别读出样品光密度值。如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD值的10倍。
　　4.若OD＜SUB＞260＜/SUB＞/OD＜SUB＞280＜/SUB＞大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。